W celu zbadania wytwarzanych przez komórki organizmu F1 białek zdecydowałeś się przeprowadzić nadekspresję odpowiedniego genu i obróbkę uzyskanego w ten sposób produktu. Podstawową techniką utworzenia elementu genetycznego, który umożliwiłby otrzymanie białka w odpowiedniej ilości, jest skonstruowanie układu badawczego na matrycy wybranego plazmidu. Poniżej przedstawiono wygenerowaną w systemie komputerowym mapę plazmidu z zaznaczonymi sekwencjami rozpoznawanymi przez enzymy restrykcyjne.
[więcej o enzymach restrykcyjnych możesz przeczytać w katalogu misji]
mapa plazmidu pMA-UW-1
Planowanie konstruktu
W celu wykonania konstruktu ekspresyjnego należy w odpowiednie miejsce (zazwyczaj w obrębie regionu MCS - na rysunku zaznaczonym błękitnym prostokątem) wprowadzić pełną sekwencję genu. Sekwencję tę można uzyskać metodą PCR, w której zastosowane startery zawierają ulokowane terminalnie sekwencje rozpoznawane przez odpowiednie enzymy restrykcyjne.
[więcej o reakcji PCR możesz przeczytać w katalogu misji]
[więcej o enzymach restrykcyjnych możesz przeczytać w katalogu misji]
Poniżej przedstawiono sekwencję fragmentu genomu organizmu F1, w którego obrębie lokalizuje się analizowany gen qieA.
Fragment genomu organizmu F1 z zaznaczoną sekwencja genu qieA
